본연구의 목적은 생체 간이식 수술중 아스코르빈산이 혈액응고에 미치는 영향을 혈전탄성도 검사를 이용하여 조사하는 것이다. 또한 간이식 수술중 아스코르빈산이 CBl-b 와 c-Cbl 의 기능적 변화에 의해 clot rigidity에 영향을 미치는지에 대하여 알아보고자 한다.  

1) 혈전탄성도 검사 
   아스코르빈산이 혈액응고에 미치는 영향을 알아보기 위해서, 환자의 활력징후가 안정화 된 후 수술이 시작하기 전, 즉 환자의 마취유도 시작 후 30분과 재관류 90분 후 환자로부터 혈액을 1.5 ml 채취하여 각 각 0.5 ml, 3 군으로 나누어 실험을 진행한다. 첫 번째 군은 대조군(C 군)으로 혈액에 아무런 제제도 섞지 않고 0.36 ml를 사용하고, 두 번째 군은 생리식염군 (N 군)으로 혈액의 희석이 혈액응고에 영향을 미치므로, 세 번째 군인 아스코르빈산 군과 동일한 혈전탄성도 조건을 만들기 위해 0.33 ml의 혈액에 0.03 ml의 생리식염수를 혼합하고, 세 번째 군은 아스코르빈산 군 (A 군)으로 총 0.36 ml에 아스코르빈산 20 μM/L의 아스코르빈산이 추가될 수 있도록 0.03 ml의 생리식염수에 아스코르빈산을 녹여 0.33 ml의 혈액에 혼합한다. 세군의 혈액의 혈전탄성도 (ROTEM®, TEM International, Munich, Germany)를 시행하여, 혈전탄성도에서 나타나는 CT (coagulation time), CFT (clot formation time), alpha-angle, MCF (maximum clot firmness), LI60 (lysis index 60 min after CT), ML (maximum lysis)와 AUC (area under the curve)를 각 각 비교 분석한다.
2) 혈소판 분리
 환자의 혈액을 혈전탄성도 검사와 동일한 시간, 즉 환자의 마취유도 시작 후 30분과 재관류 90분 후 환자로부터 혈액을 12 mL 채취하여 4ml의 혈액을 각 각 세 개의 EDTA tube에 다음과 같이 담는다. C 군에서는 4 mL의 혈액만을, A 군에서는 혈전탄성도 검사 시 사용했던 아스코르빈산의 농도와 동일하게 하기 위해서 200 μM의 아스코르빈산을 0.4 ml의 생리식염수에 녹여 3.6 mL의 혈액과 혼합하고, N 군에서는 0.4 ml의 생리식염수 만을 3.6 ml의 혈액에 혼합하고, 세 군의 혈액을 회전진탕기에서 30 분간 상온에서 혼합한다. 30분 간의 혈액을 혼합한 후에 혈소판의 분리를 시행하였으며, 혈소판의 분리는 다음과 같이 시행한다.

상세내용

1) 혈전탄성도 검사 : 대조군(C 군)은 혈액에 아무런 제제도 섞지 않고 0.36 ml를 사용하여 혈전탄성도 (ROTEM®, TEM International, Munich, Germany)를 시행한다. 
2) 혈소판 분리 : C 군에서는 4 mL의 혈액만을 회전진탕기에서 30 분간 상온에서 혼합한다. 30분 간의 혈액을 혼합한 후에 혈소판의 분리를 시행한다.

상세내용

1) 혈전탄성도 검사 : 생리식염군 (N 군)은 생리식염수 첨가로 인한 혈액의 희석이 혈액응고에 영향을 미치므로, 세 번째 군인 아스코르빈산 군과 동일한 혈전탄성도 조건을 만들기 위해 0.33 ml의 혈액에 0.03 ml의 생리식염수를 혼합하여 혈전탄성도 (ROTEM®, TEM International, Munich, Germany)를 시행한다. 
2) 혈소판 분리 : N 군에서는 0.4 ml의 생리식염수 만을 3.6 ml의 혈액에 혼합하였고, 이 혈액을 회전진탕기에서 30 분간 상온에서 혼합한다. 30분 간의 혈액을 혼합한 후에 혈소판의 분리를 시행한다.

상세내용

1) 혈전탄성도 검사 : 아스코르빈산 군 (A 군)은 총 0.36 ml에 아스코르빈산 20 μM/L의 아스코르빈산이 추가될 수 있도록 0.03 ml의 생리식염수에 아스코르빈산을 녹여 0.33 ml의 혈액에 혼합하여 혈전탄성도 (ROTEM®, TEM International, Munich, Germany)를 시행한다. 
2) 혈소판 분리 : A 군에서는 혈전탄성도 검사 시 사용했던 아스코르빈산의 농도와 동일하게 하기 위해서 200 μM의 아스코르빈산을 0.4 ml의 생리식염수에 녹여 3.6 mL의 혈액과 혼합하여, 혈액을 회전진탕기에서 30 분간 상온에서 혼합한다. 30분 간의 혈액을 혼합한 후에 혈소판의 분리를 시행한다.

 본 연구는 다음과 같은 질환으로 생체부분 간이식을 받는 환자를 대상으로 한다.  
 간세포암, 간경화증, 급성 간부전, Wilson’s disease, 독성간염 등으로 인한 간기능 손상으로 생체부분 간 이식의 적응증이 되는 환자들의 혈액이 연구에 사용되었다. 

본원에서 생체부분 간 이식술을 받는 성인 환자들을 대상으로 전향적으로, 환자들의 동의를 받은 후에 시행되었다. 

 이전에 간이식 수술을 받았던 환자나 수술 전 1주일 이내에 수혈을 받은 환자.
 수술 중 재관류 후 120분 후 혈액 샘플을 채취하기 이전에 혈소판을 수혈 받은 환자는 제외하였다. 

혈전탄성도 검사 : CT (coagulation time), CFT (clot formation time), alpha-angle, MCF (maximum clot firmness), LI60 (lysis index 60 min after CT), ML (maximum lysis)와 AUC (area under the curve)

환자의 활력징후가 안정화 된 후 수술이 시작하기 전, 즉 환자의 마취유도 시작 후 30분과 재관류 90분 후 환자로부터 혈액을 1.5 ml 채취하여 각 각 0.5 ml, 3 군으로 나누어 실험을 진행하였다.

혈소판 분리 및 Immunoblottings 

환자의 활력징후가 안정화 된 후 수술이 시작하기 전, 즉 환자의 마취유도 시작 후 30분과 재관류 90분 후 환자로부터 혈액을 1.5 ml 채취하여 각 각 0.5 ml, 3 군으로 나누어 실험을 진행하였다.