이전 예비 연구를 통해  코로나바이러스감염증-19 완치된 공여자로부터 혈액을 채취하여 사스-코로나바이러스-2 항원에 특이적인 T세포를 배양하는 기술공정과 배양된 세포의 분석방법을 확립하였고 코로나바이러스에 노출 경험이 없는 건강한 공여자에서도 코로나-특이적인 항원 T세포가 생산이 가능한지 확인하였음. 

본 연구에서는 임상시험용 코로나-특이적인 항원 T세포 생산을 위해 코로나바이러스감염증-19 완치된 공여자와 건강한 공여자를 모집하여 GMP 세포생산시설에서 생산하고 향후 임상시험용 의약품으로서 식품의약안전처의 승인을 받고자 하는데 목적이 있음. 

코로나바이러스감염증-19 (COVID-19)은 바이러스 SARS-2CoV-2 바이러스 감염에 의해 발생하는 급성 바이러스성 호흡기 질환으로 주요 증상은 발열과 호흡기 증상을 포함한다. 현재 감염증에 대한 백신이나 치료제가 없어 환자의 증상에 따라 대처하는 대중요법만 가능하다. 코로나 확진 환자의 정의는 임상양상에 관계없이 진단을 위한 검사기준에 따라 감염병 병원체 감염이 확인된 자이다. 진단검사는 코로나바이러스감염증-19 유전자(PCR) 검사, 바이러스 분리 등을 포함한다. 확진 환자 중 증상이 있는 경우 임상기준과 검사기준이 충족되면 격리해제가 된다. 임상기준은 해열제를 복용하지 않고 발열이 없으며 임상 증상이 호전된 경우이며, 검사 기준은 PCR 검사결과 24시간 간격으로 2회 검사를 실시하여 음성 결과를 확인하는 것이 원칙이다. 현재 COVID-19에 대한 특이적인 항바이러스제나 예방백신이 없는 상황에서 새로운 치료제의 개발이 시급하다.

바이러스 감염질환의 경우 완치되고 장기적으로 유지되기 위해서는 항바이러스 면역력을 구축하는 것이 필수적인 요소이다. 실제로 COVID-19 완치자의 경우에도 코로나 바이러스에 대한 면역력이 구축되는 것이 ELISPOT assay 로 확인이 되었다. 따라서, 코로나 바이러스 감염 이후에 바이러스 특이적인 T세포가 증폭이 가능하다는 증거를 제공하고 있으며 이러한 면역세포를 증폭할 수 있다면 치료제로 이용될 수 있을 것이다.

면역세포중에서 특히 세포독성 T세포(cytotoxic T lymphocyte)가 주조직적합성 분자(major histocompatibility molecules)를 통해서 바이러스 감염된 세포를 인식하고 활성화되면 그 감염된 세포를 파괴할 수 있는 능력이 있다. CTL 세포는 환자 또는 기증자에게서 분리되고 확장될 수 있기 때문에 생체 내 항바이러스 보호효과에 대한 면역세포의 역할과 입양면역치료법(adoptive immunotherapy)에 대한 전임상 및 임상연구가 진행되고 있다. 하지만 기존의 CTL 생산방법으로는 형질전환된 B세포(lymphoblastoid cell line; LCL) 또는 바이러스 항원을 제시하는 수지상세포(dendritic cell; DC)와 같은 항원제시세포(antigen presenting cell; APC)와 공여자로부터 분리된 단핵구를 공조배양하여 생산해야 하기 때문에 생산과정이 8-12주가 소요된다. 따라서 즉각적인 치료가 필요한 환자에게 사용이 불가능할 뿐만 아니라 생산단가가 높고 생산과정이 복잡하다.

본 연구진은 말초혈액에서 소량으로 존재하는 항원특이적인 T세포를 증폭시킨 이중활성 사이토카인 유도 살해세포 (Dual targeting killer cells; DTK 세포) 생산기술을 개발하였으며 이에 대한 특허를 확보하고 있다. 사이토카인을 이용한 세포 배양 과정에서 바이러스 항원에 대한 펩티드 믹스를 전략적으로 처리하면 말초혈액에 포함되어 있는 항원 특이적인 T세포가 현저히 증폭한다. 이러한 방법은 항원제시세포와 공조배양시스템과 유전자 변형 및 바이러스 감염이 필요하지 않기 때문에 낮은 비용으로 대량 생산이 가능하다는 장점이 있다. 또한, MHC 비제한적으로 작용하는 NKT세포 아형과 MHC 제한적으로 작용하는 항원특이적 CTL아형이 포함되어 있기 때문에 다양한 작용기전으로 변형된 세포를 타겟 할 수 있을 것으로 기대된다

전혈 300cc 또는 성분헌혈 250cc 채취. 1회
채취된 혈액으로부터 단핵구를 분리하여 21일간 사이토카인 처리를 통해 증폭배양 하여 항원 특이적 면역세포를 생산함.

상세내용

전혈 300cc 또는 성분헌혈 250cc 채취. 1회
건강한 대상자로부터 채취된 혈액 50cc 를 활용하여 단핵구를 분리하고 21일간 사이토카인 처리를 통해 증폭배양 하여 항원 특이적 면역세포를 생산함.

상세내용

전혈 300cc 또는 성분헌혈 250cc . 1회,
완치된 코로나 환자로부터 채취된 혈액 50cc 를 활용하여 단핵구를 분리하고 21일간 사이토카인 처리를 통해 증폭배양 하여 항원 특이적 면역세포를 생산함.

코로나바이러스 감염증-19

코로나 완치자의 경우:
1. 연구에 동의한 자
2. 만 20세에서 65세인 자
3. 코로나바이러스감염증-19를 진단받고 격리해제, 즉, 치료 받은 자- 질병관리본부의 공적 격리해제 기준을 모두 만족하는 경우를 완치로 정의한다:
A. (임상기준) 해열제 복용하지 않고 발열이 없으며 임상증상이 호전
B. (검사기준) PCR 검사 결과 24시간 간격으로 2회 음성

건강한 공여자의 경우:
1. 연구에 동의한 자
2. 만 20세에서 65세인 자
3. 발열 또는 호흡기 증상이 모두 없는 자
4. Anti-SARS-CoV-2 Ab IgG 항체가 음성인 자

1. 연구에 동의하지 않은 자
2. 만19세 이하이거나 66이상인 자
3. Anti-SARS-CoV-2 Ab IgG 항체가 양성인 자
4. HIV 항체 양성인 자, 매독검사 양성인자 혹은 B형 및 C형 간염 보균자
5. 심각한 감염이 있거나 전신적 의료처치가 요구되는 활동성 감염자
6. 다른 심각한 질환을 진단받은 자

유세포분석기를 통한 증폭배양된 바이러스 항원 특이 T세포의 CD3 T세포 마커 발현율 확인

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유세포분석기를 통한 증폭배양된 바이러스 항원 특이 T세포의 CD14 단핵세포, CD19 B세포 마커 발현율 확인

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배양된 세포의 특성규명(유세포분석을 통한 세포의 표현형 분석)

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