연구의 배경 
지방산화 저해로 인한 지방축적, 지방의 불완전 산화로 인한 케톤증 등의 대사 장애가 발생할 수 있다. 비알콜성 간질환은 지방간, 간경변, 간암에 이르는 광범위하면서 연속적인 성격을 보이고 있으나 각 단계별 진행에 관여하는 결정적 위험인자들이 밝혀져 있지 않은 상태로 전국단위 조사사업, 임상 및 인체 자원을 활용한 실질적 연구가 필요하다. 

연구 목적: 비알코올성 간질환 환자의 대변 내의 미생물과 기저 질환이 없는 건강한 피험자의 장내 미생물의 분포의 비율을 비교하여 비알코올성 간질환 환자의 장내 미생물 분포도의 변화를 파악함으로써 알코올성 간질환의 새로운 진단 방법 및 중증도 평가 방법을 모색한다. 

연구 방법 
가. 피험자의 임상적 관찰 
가톨릭관동대학교 간담췌 내과 외래에 방문한 환자 중에 간질환 발생의 원인이 비알콜성 지방간과 연관이 있다고 추정되는 환자 중에 장내 미세 환경 연구에 동의 환자에게서 대변 시료를 채취하고 지방증, 간질환의 정도 (단순 알코올 섭취, 알코올성 지방간, 알코올성 지방간염, 알코올성 간경변)와의 상관 관계를 분석한다. 비알코올성 간경변 환자 중에서 이뇨제로 조절이 되지 않는 복수를 가진 환자가 배액이 필요할 경우 배액된 복수를 채취하여 미생물 분포도를 확인한다. 
나. 장내 및 복수의 미생물 (microbiome) 분석 
▷ 최근 10년간 NGS 기술이 발달하고, 상용화 됨에 따라 분석비용이 절감되었고, 생물정보학적 분석 파이프라인 구축 수행이 보편화 되었다. 따라서 세균의 동정 마커인 16S rRNA 부분을 이용한 Illumina Miseq을 통해 장내 및 복수의 미생물의 군집을 분석하고자 한다. 
▷ 샘플링 (Sampling)과 DNA추출 (DNA extraction) 
- 각 환자군 별 채취한 분변 샘플 (200mg/aliquot)을 즉시 얼려서 보관하고, 분석 전까지 –70℃에서 보관한다. 
- 간경변 환자 중에서 복부 팽만으로 3L 이상의 배액이 필요할 것으로 보이는 환자에게서 약 20cc 정도의 복수를 채취한 후 즉시 얼려서 보관하고, 분석 전까지 –70℃에서 보관한다. 
- MoBio PowerSoil® DNA Isolation Kit를 이용하여 DNA를 추출한다. 
▷ Illumina Miseq 
- 16S rRNA의 V3과 V4부분을 Primer 341F와 805R을 이용하여 증폭하고, Illumina MiSeq을 이용하여 분석을 진행한다. 
▷ Pipeline: 16S rRNA - based taxonomic profiling 
- Miseq에서 얻은 raw data를 정리하여, taxonomic assignment를 위한 파이프라인을 구축한다. 
- 품질이 낮은 염기서열은 걸러내고, 정리과정을 거쳐 최종assembly를 통해 분류군을 나눈다. 
- 비정상적인 염기서열을 걸러내고 1차분석을 진행하고, 추후 2차분석을 진행한다. 
- Taxonomic assignment는 Taxonomic database를 이용한 염기서열 유사성 (similarity)분석을 통해서 진행한다. 
▷ 통계분석(Statistical analysis) 
- 통계분석을 통해 분류군의 풍부도(abundance) 및 분류군의 다양성(diversity)을 비교 분석한다. 

본 연구는 전향적 관찰 연구로 중재 연구가 아니므로 별도의 배정 (allocation)은 없으며, 모든 환자의 치료는 통상적인 진료 기준에 맞춰 이루어 질 것이다. 본 연구는 동일하게 최초 방문시와 1년, 2년, 3년째 검사를 실시할 예정이다. 복수의 채취는 비보상성 간경변 환자에서 3L 이상 배액이 필요할 정도로 팽창된 복수를 지닌 환자에서 약 20cc 정도 최초 1회만 채취할 것이며 채취된 분변 및 복수는 진단 검사의학과에서 검사가 이루어지고 검사 결과에 대한 자료를 검토할 것이다.

전혈, 혈청, 대변, 복수

국제성모병원을 방문한 지방간 환자

비확률적 추출법에 따라 국제성모병원을 방문한 지방간 환자 중에 연구에 동의한 환자에서 대상자를 선정

fatty liver disease, stool, microbiome

1) 20세 이상의 성인 남녀 
2) 지방간, 지방간염, 지방간염의 진행으로 발생된 간경변
3) 임상연구의 목적과 방법 등에 대한 설명을 듣고 서면 동의서에 서명한 자

1) 만성 B형 간염, 만성 C형 간염, 자가 면역성 간염, 원발성 담즙성 간경변증
2) 기타 시험자가 판단 시 임상연구 참여가 부적합하다고 판단한 자

체중 감량 전과 감량 후 대변 시료에서 장내 미세 생물 환경

임상시험 개시 후 1년, 2년, 3년

체중 감량 전후에 영상학적 및 혈액학적 변화

임상시험 개시 후 1년, 2년, 3년

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